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百合是重要的切花、盆花和庭院用植物材料。傳統的百合繁殖方法如分球、分珠芽或鱗片扦插、鱗片包埋等,存在繁殖系數較小,多代繁殖常造成退化以及種間雜交不親合等問題。采用組織培養進行百合的快速繁殖和脫毒復壯,可促進百合商品種球的生產和百合新品種的培育。 筆者以東方百合和亞洲百合為試材,采用鱗片作為外植體,研究不同濃度植物生長調節劑配比對兩種百合不定芽的誘導、芽的增殖和生根的影響,并摸索組培苗移栽的適宜條件,篩選出適合各階段的培養基及移栽基質。 不同培養基對不定芽分化的影響 剝取無菌苗小鱗莖中間層小鱗片,切取鱗片基部約0.5~0.8cm2大小的方塊作為外植體,接種于添加不同濃度6-BA和NAA的MS基礎培養基上培養,觀察不同濃度6-BA和NAA對鱗片不定芽分化的影響。培養10天后,外植體基部表面不同程度地出現了小突起,3~4周時部分小突起發育成不定芽,不定芽的發生情況見表1和表2。 由表1可以看出,東方百合鱗片在不添加任何植物生長調節劑的MS培養基上也有不定芽的發生,但是芽再生率較低且再生芽生長較弱。添加適量的6-BA與NAA有利于不定芽的誘導。6-BA濃度為0.1mg/L時,所有組合都獲得100%芽再生率,平均每個外植體獲得的不定芽數在NAA濃度為0.5mg/L時最多,為3.5個。6-BA濃度達到0.5mg/L時,不定芽呈叢狀生長,生長較弱。 對于亞洲百合,由表2可以看出,不同濃度6-BA和NAA配比,芽再生率及平均每個外植體再生的不定芽數不同。6-BA與NAA的比值大于或等于1.0時,芽再生率較高,在6-BA濃度為1.0mg/L、NAA濃度為1.0mg/L時達到最高,為100%。6-BA濃度低于1.0mg/L,NAA濃度低于6-BA濃度時,不定芽的再生情況較好,兩者的濃度都為0.5mg/L或1.0mg/L時獲得較多生長健壯的不定芽,分別為4.0和4.3;6-BA濃度達到1.5mg/L,不定芽生長較弱,并且出現不同程度的玻璃化現象。 與亞洲百合相比,東方百合小鱗片不定芽分化在添加較低濃度植物生長調節劑的培養基上即可獲得較好的結果,在本研究中,最適培養基為MS+0.1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA,而亞洲百合小鱗片不定芽分化的最適培養基為MS+1.0mg/L6-BA+1.0mg/LNAA。 不同濃度6-BA 對不定芽增殖的影響 將東方百合和亞洲百合鱗片外植體上產生的不定芽接種到添加不同濃度6-BA和NAA的MS培養基上進行不定芽的增殖培養。結果表明,兩種百合的不定芽在不同濃度6-BA下都實現了增殖。東方百合在6-BA濃度較低時獲得較高的增殖倍數,6-BA為0.1mg/L時增殖倍數最高,為3.9;亞洲百合不定芽增殖需要的6-BA濃度比東方百合的高,濃度為0.5mg/L時獲得的增殖倍數最高,為3.4(見表3)。 不定芽生根培養及移栽 不定芽在不同生根培養基上的生根情況表明,東方百合不定芽在MS基礎培養基上的生根情況優于1/2MS基礎培養基,適當添加一定量的6-BA更有利于東方百合的生根,在添加0.1mg/L6-BA和0.2mg/LNAA的MS培養基上,東方百合不定芽的生根情況最好(見表4);亞洲百合不定芽在MS培養基及添加0~0.5mg/LNAA的1/2MS培養基上都能生根,其中以在添加0.2mg/LNAA的1/2MS培養基中生根數量最多,且植株生長健壯,利于移栽(見表5)。 當組培苗的根長長至1~2cm后即可進行馴化移栽。移栽前先開瓶煉苗,煉苗結束后洗凈根上的培養基,然后移栽至不同基質中。移栽初期的小苗必須給予精心管理,保證充足的光照和空氣濕度,讓小苗慢慢適應外界環境,移栽后期對成活的小苗也要用心管理才能保證小苗的正常發育,忌大旱大澇。移栽45天后統計移栽成活率,以蛭石∶土為1∶1作為基質時,移栽成活率在80%左右,而以蛭石∶珍珠巖為1∶1作為基質時移栽成活率大于95%(見表6)。(楊春起 李邱)( 佚名)
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